胎牛血清的常规储存温度为-20℃，若需长期保存则建议在-80℃下存放。在解冻过程中，不建议直接将血清置于常温（25-37℃）下，这可能导致絮状沉淀的形成，从而影响血清的质量。最佳解冻方式为将血清从-20℃或-80℃转移至4℃，待其完全融化为液体后，再将其移至室温。在解冻时，建议定期轻轻摇动，以确保血清内成分和温度均匀混合，从而减少沉淀的发生。

解冻后，您可以将血清分装至15mL或50mL的无菌离心管中进行冻存。根据实际使用频率，可以在4℃下保存一管已解冻的血清，以便方便地进行培养基的配置。但请注意，不应在4℃下存放太久，最好在一个月内使用完毕。解冻后的胎牛血清不宜在37℃或室温下存放过长时间，以免导致重要的细胞生长因子失活，影响细胞状态。

关于血清的添加量，原则上不宜过多，通常使用5%、10%或20%的浓度。大部分细胞在正常培养条件下使用10%的血清，而某些原代细胞提取时可使用20%的血清。具体的血清浓度选择需根据细胞特性和实验目的进行调整。

热灭活是指将已解冻的血清在56℃下处理30分钟，此步骤可使补体去活化，它们参与的反应包括溶细胞活性、平滑肌收缩和免疫细胞的激活。对于常规细胞培养，热灭活通常不是必需的步骤，经过高温处理的血清可能会影响其质量，从而降低细胞的生长速率，增加沉淀等不良影响。

在细胞培养过程中，可能会遇到需要更换血清的情况。如果直接用另一款血清重新配制培养基，之前生长良好的细胞可能会出现生长减缓，甚至脱壁死亡的现象。这通常是因为细胞在原有培养环境中适应后，突然更换新的营养环境，无论新血清质量如何，都可能导致细胞不适应。因此，更换血清时应遵循梯度更换的原则，以帮助细胞逐渐适应新环境。在血清的使用初期，建议先用原有培养体系进行复苏，待细胞状态恢复后，再进行测试。

在测试中，不建议一次性将细胞培养转为100%新的血清体系，而应根据比例梯度进行替换。例如，第一次更换液体时按新旧体系1:3比例，第二次1:1，第三次3:1，最后完全替换。对于某些对培养体系敏感的细胞，替换比例可能需要进一步细化。

解冻后，如发现少量乳白色的絮状或点状物质，这主要是由血清中的脂蛋白变性及纤维蛋白导致，这些絮状物质不会影响血清质量，您可以通过400×g离心5分钟取上清来自然去除，通常对细胞生长影响不大。

一般情况下，厂家提供的血清为无菌状态，无需再次过滤。如果发现血清中有悬浮物，则应将其加入培养液中共同过滤，切勿单独过滤血清。若在细胞培养中发现黑点产生，需首先检查培养基是否混浊，以及黑点是否有不规则游动。如果细胞受到污染，微生物将大量繁殖，导致培养基快速变黄和混浊。污染可能包括细菌、支原体等。如果在显微镜下观察细胞的生长状态良好且未见变化，则黑点的出现可能与细胞破碎的残骸、血清中的杂蛋白或培养基水质及容器不合格有关。可以通过离心和过滤方法去除这些黑点，对原代细胞中的小黑点，经过多次传代通常可消除。

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