### 一、细胞培养条件

**细胞名称**：生长特性贴壁生长

**冻存条件**：无血清冻存液

**培养体系**：1640+10%FBS+1%P/S+1%丙酮酸钠+1%L-谷氨酰胺

**传代方法**：首次建议1:2传代

**传代情况**：每2天换液

**备注**：用无菌离心管收集培养基以备对比培养。如对比效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基以确保培养效果，品牌推荐[ag尊龙凯时]。

### 二、细胞收到后的处理

细胞到达后，请在细胞生长至良好状态后，将完全培养液灌满并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，应用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后放置在超净工作台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况并对细胞进行不同放大倍数的照片采集（最佳包括40倍、100倍及200倍各一张），前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片，则默认状态良好。

在传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另瓶使用自制完全培养基，以便进行对比培养，并在换液后将瓶盖轻微拧松。

### 三、细胞培养步骤

a、细胞传代：若细胞密度未超过80%，请将瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基并放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养；若细胞密度已超过80%，则可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，并用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱内消化1-2分钟，显微镜下观察细胞是否大部分变圆并脱落。若观察到此情况，迅速将其拿回操作台，轻轻敲打培养瓶后添加超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保其完全脱落后吸出，再将悬液转移至离心管。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，并加入1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 将细胞悬液按1:2的比例转瓶（分至两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后再将其放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存：当细胞生长覆盖培养瓶的80%面积时，请弃去T25培养瓶中的培养液并用PBS清洗细胞一次。然后添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，倒置观察，待细胞收缩变圆后立即加入5ml完全培养基以终止消化。轻轻吹打细胞以使其脱落，随后将悬液转移至15ml离心管中并以1000RPM离心5分钟。弃去上清后，将细胞沉淀加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。将冻存细胞放入-80℃冰箱保存，若后期需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放超过24小时才可转入液氮罐中。

细胞复苏：从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护装备），迅速将其放入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶现象，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。将冻存管中的细胞转移至含有5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。弃去上清后，用5ml完全培养基重悬细胞，最后接种至T25培养瓶中，并放置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中。次日更换为新鲜的完全培养基以继续培养。

### 注意事项

某些细胞可能在运输过程中未能牢固贴壁，有脱落现象，这属正常。如脱落的细胞较多，请将培养瓶内的培养液收集至离心管中，并用上清进行过渡培养。对于后续的对比培养，沉淀可继续使用胰酶在细胞培养箱中培养。

### 五、售后条款

1. 细胞出现问题的重发条件：
   1. 因运输问题导致的细胞丢失、瓶身破损、培养液严重泄漏等情况将予以重发。
   2. 细胞污染问题，需在收到产品48小时内提供真实实验结果，确认后可重发。
   3. 常温发货细胞在静置24小时后或干冰发货细胞复苏24小时后，若大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），则可重发。
   4. 如干冰发货细胞复苏后24小时或常温发货细胞静置4小时内未开封出现污染，亦可重发。
   5. 如细胞活性问题，需在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，确认后可重发。
   6. 在收到细胞当天及第2、3天请拍照，若三天未通知视为产品合格。若4-7天内出现问题，应提供前三天照片及细胞操作详细步骤，与技术人员沟通后由技术人员判定责任，符合我方责任的可重发。
2. 细胞出现问题不予以重发的情况：
   1. 客户造成的细胞污染，不予重发。
   2. 客户因不当操作导致细胞状态不良的不予重发。
   3. 使用非本库推荐的细胞培养体系导致的细胞状态不良，不予重发。
   4. 细胞状态不良且未提供前三天照片，不予重发。
   5. 有其他不当处理的细胞，不予重发。
   6. 收到细胞两天内未及时反馈，不予重发。
   7. 其他情况将在具体情况下进行判断。

我们的品牌致力于为客户提供最优质的细胞培养解决方案，确保您的科研工作顺利进行。选择[ag尊龙凯时]，成就您的科研梦想。